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第二节　灭菌方法与无菌操作

　　一、F与F0值在灭菌中的意义与应用

　　1.D值与Z值

　　D值：在一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物降低90%所需时间。也可以看作在一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物降低一个数量级所需时间。

　　Z值：降低一个lgD值所需升高的温度(℃)，也可以看作灭菌时间减少到原来的1/10所需升高的温度值。

　　2.F值与F0值

　　F值：在一定灭菌温度(T)下，给定Z值所产生的灭菌效果与在参比温度(T0)给定Z值所产生灭菌效果相同时所相当的灭菌时间。

　　F0值：在一定的灭菌温度(T)下，Z值为10℃时所产生的灭菌效果与121℃，Z值为10℃所产生的灭菌效果相同时所相当的时间(分钟)。F0值目前仅限于热压灭菌。

　　生物F0值可看作相当于121℃热压灭菌时，杀灭物品中全部微生物所需时间。

　　配伍选择题

　　A.F0值

　　B.F值

　　C.Z值

　　D.D值

　　E.lgNt

　　将灭菌过程中不同受热温度与时间折算到与121℃热压灭菌效力相当的时间的参数是( 　)

　　相当于l21℃热压灭菌时，杀灭物品中全部微生物所需时间的参数是( 　)

　　『正确答案』A A

　　二、常用的灭菌方法

　　(一)物理灭菌法

　　1.干热灭菌法

　　系指利用火焰或干热空气达到杀灭微生物或破坏热原物质的方法。

　　机理：加热可以破坏蛋白质与核酸中的氢键，导致蛋白质变性或凝固，核酸破坏，酶失去活性，使微生物死亡。

　　特点：干燥状态下，热穿透力差，微生物的耐热性强，需长时间高热才能达到灭菌的目的。

　　干热灭菌条件：一般为(160～170)℃×120min以上、(170～180)℃×60min以上或250℃×45min以上;250℃×45min的干热灭菌也可除去无菌产品包装容器及有关生产灌装用具中的热原物质。

　　适用于：耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品灭菌，如玻璃器皿、纤维制品、金属材质容器、固体药品、凡士林、液体石蜡等。

　　2.湿热灭菌法

　　特点：蒸汽潜热大，穿透力强，容易使微生物变性凝固，灭菌效率比干热法高。

　　(1) 热压灭菌法：

　　特点：灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。

　　适用于：药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化和损坏的物品均可采用本法灭菌。

　　湿热灭菌条件：通常采用126℃×15min、121℃×30min或116℃×40min的程序。标准灭菌时间F0值一般不低于8min。

　　(2)流通蒸汽灭菌法和煮沸灭菌法：

　　条件：一般为100℃，30～60min。

　　特点：杀灭繁殖型细菌，但不一定能完全杀灭细菌孢子。

　　适用于：一般可作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。

　　(3)低温间歇灭菌法：

　　适用于：必须采用加热灭菌但又不耐较高温度的产品。

　　3.过滤除菌法

　　机理：利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理以除去气体或液体中微生物。

　　适用于：热不稳定的药品溶液或原料的除菌。

　　除菌微孔滤膜孔径一般不超过0.22μm。

　　4.紫外线灭菌法

　　波长254nm的紫外线杀菌力最强，

　　机理：可使微生物核酸蛋白变性死亡，同时空气受紫外线辐射后产生的微量臭氧也起灭菌作用。

　　适用于：表面和空气的灭菌。

　　5.60Co-辐射灭菌法灭菌法

　　机理：γ射线可使有机化合物分子直接发生电离，破坏正常代谢的自由基，导致微生物体内大分子化合物分解而被杀灭。

　　特点：穿透力强，灭菌过程中，被灭菌物品温度的变化小。

　　适用于：医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法灭菌;尤其适用于已包装药品的灭菌。

　　6.微波灭菌法

　　微波是指频率在300MHz到300kMHz之间的电磁波。

　　机理：水和极性分子可强烈地吸收微波，使其分子运动和相互摩擦迅速升温。微生物因体内蛋白质同时受热和极性转动两方面的作用，空间结构变化或破坏而变性死亡。

　　特点：微波能穿透到介质的深部，通常可使介质加热表里一致。

　　适用于：水性药液的灭菌，也适用于药材饮片及固体制剂的灭菌。

　　(二)化学灭菌法

　　杀菌机制可能是：作用于微生物核酸蛋白，使其变性、与微生物酶系统结合影响代谢或改变膜壁通透性致微生物死亡等。

　　气体灭菌法系指利用化学药品形成的气体杀灭微生物的方法。常用的化学药品有环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、臭氧等。常用的气体是环氧乙烷。

　　特点：环氧乙烷分子易穿透塑料、纸板和固体粉末。

　　适用于：塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固体药料及其他不能采用高温灭菌的物品灭菌。

　　含氯物品以及能吸附环氧乙烷的物品不宜采用本法灭菌。

　　最佳选择题

　　适用于空气和表面灭菌的方法是( 　)

　　A.60Co-辐射灭菌法

　　B.微波灭菌法

　　C.紫外线灭菌法

　　D.流通蒸汽灭菌法

　　E.环氧乙烷气体灭菌法

　　『正确答案』C

　　配伍选择题

　　A.干热灭菌法

　　B.热压灭菌法

　　C.流通蒸汽灭菌法

　　D.环氧乙烷灭菌法

　　E.紫外线灭菌法

　　注射用油、液体石蜡的灭菌宜采用( 　)

　　包装于塑料袋内的颗粒剂的灭菌宜采用( 　)

　　500ml装葡萄糖输液的灭菌宜采用( 　)

　　表面和空气的灭菌宜采用( 　)

　　『正确答案』A D B E

　　A.干热灭菌

　　B.流通蒸汽灭菌

　　C.热压灭菌

　　D.煮沸灭菌

　　E.紫外线灭菌

　　空气的灭菌多采用( 　)

　　输液剂的灭菌宜采用( 　)

　　眼膏基质凡士林的灭菌应采用( 　)

　　『正确答案』E C A

　　三、无菌操作法

　　无菌操作应在无菌操作室或无菌操作柜内进行，其操作要点与注意事项为：

　　① 严密控制操作环境的洁净度;

　　② 相关设备、包装容器、塞子等应采用适当的方法灭菌，并防止再次污染;

　　③ 操作过程的无菌保证应通过培养基无菌灌装模拟试验验证;

　　④ 严密监控操作环境的无菌空气质量、操作人员素质、各物品的无菌性;

　　⑤ 无菌操作工艺应定期进行验证。